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人骨成型蛋白3(BMP-3) elisa試劑盒的應(yīng)用場(chǎng)景

  • 發(fā)布日期:2024-09-22      瀏覽次數(shù):876
    •   人骨成型蛋白3(BoneMorphogeneticProtein3,BMP-3)是一種重要的細(xì)胞因子,屬于骨成型蛋白家族。BMP-3在骨的發(fā)育、修復(fù)和重塑過程中起著至關(guān)重要的作用。由于BMP-3在骨代謝中的重要性,針對(duì)其濃度的測(cè)定成為基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用的重要手段。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)是一種常用的定量檢測(cè)方法,能夠準(zhǔn)確、靈敏地測(cè)定樣品中的BMP-3水平。
       

       

        1.微孔板:預(yù)先涂覆有抗BMP-3的抗體的96孔板,用于捕獲樣品中的BMP-3。
        2.標(biāo)準(zhǔn)品:已知濃度的BMP-3標(biāo)準(zhǔn)品,通常以凍干粉形式提供,用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
        3.稀釋液:用于稀釋樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,通常為一種緩沖液,確保反應(yīng)的穩(wěn)定性。
        4.酶標(biāo)記抗體:與BMP-3特異性結(jié)合的酶標(biāo)記二抗,用于增強(qiáng)信號(hào),常用的酶包括辣根過氧化物酶(HRP)。
        5.底物溶液:特異性底物與酶反應(yīng)后生成顯色產(chǎn)物,通常使用TMB作為底物。
        6.終止液:用來終止反應(yīng),常用的酸液(如1N硫酸)可使顯色反應(yīng)停止。
        7.洗滌液:用于清洗微孔板,去除未結(jié)合的成分。
        實(shí)驗(yàn)步驟:
        1.樣品準(zhǔn)備:收集血清、組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣品,根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行適當(dāng)稀釋。
        2.加樣:在微孔板的每個(gè)孔中加入樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,通常每個(gè)孔重復(fù)操作三次,以確保結(jié)果的可信性。然后在適宜的溫度下孵育1-2小時(shí),使BMP-3與捕獲抗體結(jié)合。
        3.洗滌:使用洗滌液清洗微孔板,去除未結(jié)合的成分,通常洗滌5-6次,確保板的干凈。
        4.添加酶標(biāo)記抗體:在每個(gè)孔中加入酶標(biāo)記抗體,繼續(xù)孵育1小時(shí),使酶標(biāo)記抗體與BMP-3形成復(fù)合體。
        5.再次洗滌:再次使用洗滌液清洗微孔板,以去除未結(jié)合的抗體。
        6.添加底物:向每個(gè)孔中加入底物溶液,通常孵育15-30分鐘,直到顏色顯著上升。
        7.終止反應(yīng):在適當(dāng)時(shí)間后,加入終止液以終止反應(yīng),此時(shí)孔內(nèi)的顏色會(huì)立刻改變。
        8.測(cè)定吸光度:使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定每個(gè)孔的吸光度(OD值),585nm波長(zhǎng)下的參考值用于修正干擾。
        應(yīng)用領(lǐng)域:
        1.基礎(chǔ)研究:BMP-3在骨細(xì)胞的增殖和分化、成骨和骨重塑中發(fā)揮重要作用,ELISA可用于相關(guān)的機(jī)制研究。
        2.臨床診斷:BMP-3在一些骨骼疾病(如骨質(zhì)疏松癥、骨折愈合不良)中可能存在變化,ELISA可以作為輔助診斷工具。
        3.藥物開發(fā):通過評(píng)估BMP-3水平變化,研究新藥對(duì)骨代謝的影響。
        人骨成型蛋白3(BMP-3) elisa試劑盒注意事項(xiàng):
        1.樣品處理:對(duì)樣品處理要盡快進(jìn)行,以防止BMP-3降解。建議使用冷凍保存樣品。
        2.實(shí)驗(yàn)環(huán)境:ELISA實(shí)驗(yàn)需要在恒溫環(huán)境下進(jìn)行,以避免溫度變化對(duì)結(jié)果的影響。
        3.質(zhì)量控制:使用對(duì)照組控制實(shí)驗(yàn)的有效性;標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)每次實(shí)驗(yàn)均需建立。
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